產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
RNAclean RNA 清潔純化試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：豬（杜洛克）腹部脂肪干細(xì)胞（永生化） 心臟肌球蛋白輕鏈2封閉多肽 斑點(diǎn)氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒 4香豆酸：連接酶（4CL)酶活性比色法檢測(cè)試劑盒 粒落曲霉 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白158抗體
更新時(shí)間：2024-01-12
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
A-Hc2010 | RNAclean RNA 清潔純化試劑盒 | 50 次 |
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：
一、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前，通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。
二、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。
三、延伸：
DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
公司正在出售的產(chǎn)品：
馬胃葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 二氫嘧啶酶樣2ELISA試劑盒 DPYSL2免費(fèi)代測(cè)試劑 | 甲型流感病毒H5N1亞型 染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
丁香染料法PCR鑒定試劑盒 | 表面膜免疫球蛋白MELISA試劑盒 mIgM免費(fèi)代測(cè)試劑 | 庚型肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng) |
山羊關(guān)節(jié)炎腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 補(bǔ)體成分1rELISA試劑盒 | 南非諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
天花病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 博來水解酶ELISA試劑盒 | 納氏蟲屬通用·探針法熒光定量PCR試劑盒 |
荔枝核探針法PCR鑒定試劑盒 | 超敏前列腺特異性抗原ELISA試劑盒 | 鼻疽伯克霍爾德氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
犬腺體病毒2型(犬傳染性喉氣管炎病毒）染料法熒光定量PCR試劑盒 | 叢狀蛋白A1ELISA試劑盒 | 乙型肝炎病毒基因分型PCR測(cè)定試劑盒 |
犬支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 | 單純皰疹病毒Ⅱ型抗體IgGELISA試劑盒 | 牛傳染性胸膜肺炎探針法熒光定量PCR試劑盒 |
利什曼原蟲通用PCR檢測(cè)試劑盒 | 蛋白C10ELISA試劑盒 | 馬立克氏病病毒3型PCR檢測(cè)試劑盒說明書 |
鯉皰疹病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 | 蛋白酪磷酸酶受體RELISA試劑盒 | 密蒙花染料法PCR鑒定試劑盒 |
犬流感病毒11型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 動(dòng)力蛋白激活蛋白2ELISA試劑盒 | 南非諾卡菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
柯薩奇病毒 A2 型 / 柯薩奇病毒 A4 型 / 柯薩奇病毒 A5 型核酸檢測(cè)試劑盒( 三重?zé)晒?PCR 法 ) | 人核因子κB抑制物激酶α(IKK-α)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 牛附紅細(xì)胞體（牛嗜血支原體）PCR試劑盒 |
禽病毒H5/H7/H9亞型PCR檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法） | 人基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)試劑盒elisa | 禽腺病毒C型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
鵪鶉奇異線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 | RNAclean RNA 清潔純化試劑盒人鈣衛(wèi)蛋白ELISA試劑盒 | 耐青肺炎鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
產(chǎn)酸克雷伯菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人MAP磷酸酶雙特異性磷酸酶1(DUSP-1)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 克柔念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
彎曲桿菌S rRNA基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針法) | 人白介素32(IL-32)試劑盒ELISA | 牛分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1、變性溫度和時(shí)間：
保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長(zhǎng)，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復(fù)性溫度和時(shí)間:
PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。
3、延伸溫度和時(shí)間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí)，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意，延伸時(shí)間過長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴(kuò)增增加。
